該儀器是一款緊湊型、操作簡便的電穿孔儀，適用于細菌、酵母及哺乳動物細胞的電轉染。其核心特點是預設了針對常見細胞類型的優化程序，同時也支持用戶自定義參數。

一、伯樂MicroPulser電穿孔儀標準操作規程

1、目的

規范伯樂MicroPulser電穿孔儀的標準化操作與日常維護，確保電轉染實驗的重現性、高效性，保障操作人員安全，并延長儀器使用壽命。

2、適用范圍

適用于使用伯樂MicroPulser電穿孔儀進行微生物（如大腸桿菌）或哺乳動物細胞的電轉化/電轉染實驗。

3、安全注意事項

（1）高壓警告：儀器工作時產生高達2500V的高壓脈沖。嚴禁在電擊時打開樣品槽蓋或觸碰電極。僅在儀器“Ready"指示燈亮起且蜂鳴器提示結束后，方可開蓋。

（2）個人防護：操作時應佩戴絕緣手套。處理生物樣品時，需同時佩戴實驗手套。

（3）環境安全：保持工作區及儀器表面干燥。避免緩沖液或樣品濺灑到電極或樣品槽內。

（4）專用耗材：必須使用一次性無菌電擊杯。禁止重復使用，以防交叉污染和電弧放電。

（5）樣品要求：電擊杯中的樣品體積必須準確（通常為40-200µl，常用100µl），且液體不能濺到杯壁外側，確保電極接觸良好。

4、操作前準備

A、儀器準備：

（1）確認電源線連接牢固。

（2）打開儀器背面電源開關。

（3）儀器自檢，屏幕點亮，進入主界面。

B、耗材與試劑準備：

（1）電擊杯：從包裝中取出所需數量的1mm或2mm間隙（根據細胞類型選擇）的一次性無菌電擊杯，置于冰上預冷（對溫度敏感的細胞）。

（2）細胞與DNA：制備處于對數生長期、經洗滌并重懸于低電導率緩沖液（如冰冷無菌水或特定電轉緩沖液）中的感受態細胞/待轉染細胞。將DNA與細胞懸液輕柔混勻。

（3）回收培養基：準備好預熱的富含SOC/LB（細菌）或培養基（哺乳動物細胞）的回收管。

C、程序選擇：

（1）預設程序：按 Pgrm 鍵，使用旋鈕選擇對應的預設程序（例如：Ec1 用于大腸桿菌，Sc 用于釀酒酵母，AHC 用于動物細胞高電容模式等）。

（2）自定義程序：按 User Pgrm 鍵，可手動設定電壓 (V)、電容 (µF) 和電阻 (Ω) 參數。

二、伯樂MicroPulser電穿孔儀標準操作流程

1、步驟一：參數加載與確認、

（1）選擇或設定好程序后，屏幕會顯示相應的電壓、電容、電阻和時間常數（由儀器計算）。

（2）仔細核對參數是否與實驗方案一致。

2、步驟二：加樣與電擊

（1）用移液器將 DNA-細胞混合懸液（通常為40-100µl）輕柔、（2）快速地加入預冷的電擊杯中，避免產生氣泡。

（3）用吸水紙擦干電擊杯外壁，確保無液體殘留。

（4）平穩、快速地將電擊杯滑入樣品槽，確保其底部與電極緊密接觸，聽到/感到“咔噠"聲。

（5）關閉樣品槽蓋。

（6）同時按下儀器面板上的兩個脈沖觸發按鈕（位于左右兩側，需雙手操作，此為安全設計）。

（7）儀器發出蜂鳴聲，電擊瞬間完成。屏幕顯示實際施加的電壓和時間常數（Time Constant）。記錄此時間常數，它是評估電擊效率的重要指標（通常5-20ms為佳）。

3、步驟三：樣品回收

（1）電擊結束后，儀器再次發出蜂鳴提示。此時“Ready"燈亮起。

（2）打開樣品槽蓋，取出電擊杯。

（3）立即向電擊杯中加入0.5-1 ml預熱的回收培養基（或直接將其全部轉移至含回收培養基的試管中）。

（4）用移液器輕輕吹吸數次，將細胞溫和、重懸。

（5）將細胞懸液轉移至合適的培養容器中，在適宜條件下進行復蘇培養。

4、步驟四：結束實驗

（1）棄用過的電擊杯至生物危害垃圾桶。

（2）如果后續無人使用，關閉儀器背面電源開關。

（3）清潔工作區域。

三、日常與定期維護流程

1、每次使用后：

（1）檢查并清潔電極：用蘸有70%乙醇的無塵棉簽或鏡頭紙輕輕擦拭樣品槽內的兩個金屬電極觸點，去除可能存在的鹽結晶或樣品殘留。待其風干后蓋上樣品槽蓋。

（2）保持清潔：用濕布擦拭儀器外殼。

2、每周/每月：

（1）檢查樣品槽內部是否有頑固污漬。如有，可用棉簽蘸取溫和清潔劑（如稀釋的實驗室清潔劑）清潔，再用乙醇棉簽擦拭，確保風干。

（2）檢查電源線和插頭是否完好。

3、注意事項：

（1）嚴禁向樣品槽內直接傾倒任何液體。

（2）嚴禁使用腐蝕性、強酸強堿或丙酮類溶劑清潔電極。

（3）儀器長期不使用時，應拔下電源插頭，并用防塵罩覆蓋。

四、故障排除

1、儀器無反應/不啟動：檢查電源連接和背面開關。

2、無法觸發脈沖（按下按鈕無反應）：

（1）確認樣品槽蓋已關閉。

（2）確認電擊杯已正確、緊密地放置到位。

（3）確認是否同時按下了兩個觸發按鈕。

3、電弧（聽到“啪"的爆裂聲，時間常數極短）：

（1）常見原因：電擊杯內樣品體積不正確、有氣泡、或含有高鹽分。

（2）電擊杯重復使用或外壁不潔。

（3）細胞懸液中有雜質或過濃。

（4）應對：丟棄該樣品，使用新的電擊杯并重新制備低電導率的細胞懸液。

4、時間常數過短：通常與上述導致電弧的原因相同，或預設電壓過高。

5、時間常數過長：細胞懸液電導率可能過低，或電容/電阻設置不匹配。