賽默飛StepOne實時熒光定量PCR系統的日常維護保養，這里為您整理了一份詳細、可操作的指南。遵循這些步驟可以顯著提高實驗的重復性、延長儀器壽命并減少故障。維護保養可以分為 “日常常規維護"、“周期性維護"和“特殊狀況處理" 三部分。

一、賽默飛StepOne實時熒光定量PCR日常常規維護

這是最基本也是最重要的部分，主要針對可能產生污染和影響儀器性能的環節。

1、實驗前：

（1）儀器外部清潔：用柔軟的濕布（可蘸取少量溫和的清潔劑或75%乙醇）擦拭儀器外殼、屏幕和鍵盤，去除灰塵和潛在污染物。注意：不要讓任何液體流入儀器內部。

（2）檢查熱蓋：確保熱蓋清潔、無殘留物（如封口膜碎屑、油污等）。如果有污染，用無塵棉簽蘸取75%乙醇或去離子水輕輕擦拭。

（3）準備耗材：

使用高質量、無RNase/DNase的PCR管/板。

確保反應板或八聯管底部潔凈、無指紋，以免影響熒光讀取。

正確使用光學封膜，確保密封平整，無褶皺，防止蒸發和污染。

2、實驗后：

（1）反應塊清潔：

這是核心步驟！ 運行完程序，待反應塊溫度降至室溫或以下后，打開反應塊。

使用無塵棉簽或壓縮空氣，仔細清除反應塊樣品槽內可能殘留的灰塵、冷凝水或極少數液體濺出物。

如果發現有液體濺溢，必須立即清潔：

（2）立即用無塵棉簽吸干液體。

（3）再用棉簽蘸取75%乙醇擦拭污染區域。

（4）最后用干棉簽擦干，并讓乙醇揮發后再運行下一個程序。

（5）熱蓋清潔：同實驗前檢查，如有必要，進行清潔。

（6）臺面清潔：實驗結束后，清理儀器周圍臺面，保持整潔。

二、周期性維護

這部分維護旨在確保光學系統和溫控系統的長期穩定性。

1、光學系統校準與驗證

（1）光譜校準：建議每3-6個月進行一次，或者在更換了不同品牌的耗材/染料、移動儀器后、或發現信號基線異常時進行。

操作：在電腦軟件界面中，選擇“Tools" -> “Calibration" -> “Spectral Calibration"。按照屏幕提示，放入空的、潔凈的適配板，運行校準程序。校準時務必關閉實驗室燈光，避免光線干擾。

（2）熒光校準：使用ROX參考染料時，系統通常會自動進行。如果實驗方案要求精確的ROX校正，可定期運行廠家提供的校準板進行驗證。

2、背景信號檢測

定期運行一個空反應（只加水或緩沖液）的程序，檢測各通道的背景熒光值。這有助于判斷反應塊或光學組件是否存在污染或性能衰減。

3、運行性能驗證

使用已知濃度和擴增效率的DNA樣本（如賽默飛提供的性能驗證試劑盒），定期運行qPCR實驗，檢查Ct值的重復性、標準曲線的斜率和R2值，確保儀器整體性能達標。

4、深度清潔

對反應塊、熱蓋和儀器內部不易觸及的區域進行清潔。在進行深度清潔前，請務必關閉儀器電源并拔掉電源線。

三、特殊狀況處理

1、污染處理：

核酸污染：如果懷疑由氣溶膠導致的PCR污染，需要對實驗室環境和工作臺進行去污染處理（如使用DNA/RNA清除劑）。同時，對儀器反應塊和熱蓋用DNA/RNA清除劑擦拭，然后用75%乙醇擦拭以去除殘留。

熒光染料污染：如果發生染料泄漏，立即用棉簽和75%乙醇清潔，防止染料干涸后難以清除并影響熒光檢測。

2、軟件與數據備份：

定期更新儀器固件和軟件至新版本，以獲取性能優化和漏洞修復。

定期備份實驗數據和儀器設置，防止數據丟失。